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流式细胞分选抗体的常规处理方法

 发布时间:2022-06-20    点击量:780
  流式细胞分选是指将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程。细胞纯化更进一步强调从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。通过细胞的分离和纯化过程,使培养物成为单一类型培养物,甚至是遗传特性完全一致的培养物,后者即细胞系。许多情况下,细胞分离和纯化并不是完全彻底的,培养物中只能达到以某种细胞为主的程度,所以也成称为富集。
 
  分离和纯化细胞的过程不仅仅在原代培养之前进行的,有时分离和纯化细胞的过程还贯穿于原代培养和继代培养的过程中,甚至是主要依赖培养过程实现分离和纯化细胞的目的。培养物中细胞成分是否单一或者目的细胞在培养物中的比例如何,常是衡量某一培养工作是否成功的重要指标。细胞分离纯化的方法有密度梯度离心技术、逆流淘析分离技术、利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法等。
 
  流式细胞分选抗体的常规处理方法:
  1、分选外周血,骨髓时:加抗凝剂,去红细胞;
  2、分选组织时,机械分离或胶原酶;
  3、培养细胞,使用胰酶消化。
  在实际细胞分离中,因为流式分选的办法价格相对比较昂贵,实验者一般都会采取别的方法分离细胞。下面列出来几种其它细胞分离方法不能替代的情况,这些情况下必须进行流式的细胞分选:
  1、要求目标细胞群有*的纯度(95%-100%);
  2、需要分离低密度表面受体/抗原的细胞;(弱阳性细胞);
  3、需要根据表面受体密度的差别来分离不同细胞;(根据免疫表型的分选,抗体亲和力进化等);
  4、需要依据多色荧光标记来分选细胞;
  5、根据某些细胞内部标志,如DNA含量、胞内抗原等分离细胞;
  6、多孔板分选。如单克隆分选,在96孔板每个孔中精确的分选进1个细胞;
  7、需要分选极低含量的细胞(如0.001%或更低)。流式可以分选出百万分之一的稀有细胞。
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