血清使用常见问题

l 血清

血清是生长和附着因子、矿物质、脂质和激素的来源，是细胞培养的重要组分。血清能调节细胞膜的通透性，同时能作为载体携带酶、脂质、酶和微量元素等进入细胞。

l 血清使用的常见问题

Q1. 收到的血清有部分解冻的现象，影响后续使用吗？

正常情况下，血清应冷冻送达。但是如果血清有部分解冻，仍可继续使用。血清在解冻后，根据实验需求分装成单次用量后再进行储存以供后续使用。

Q2. 血清需要避光保存吗？

正常情况下，在室内或实验室灯光的照明下，不影响血清的使用。但不建议将血清暴露在波长短或强度高的光下，因为血清中含有一些对光敏感的成分。

Q3. 血清必须热灭活吗？

热灭活可以破坏血清中补体的活性。哺乳动物血清中存在的补体蛋白参与细胞的溶解，收缩平滑肌，刺激细胞和血小板释放组胺，并激活淋巴细胞和巨噬细胞。有研究比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响（如下图所示），发现11株细胞中，热灭活对6株细胞有负面影响（红框）、3株无影响（绿框）、2株有微弱正面改善（黄框），因此在多数细胞培养中血清不需要热灭活，热灭活对细胞生长没有明显的促进作用，反而还会影响血清质量，使细胞的生长速率降低。因此如果不是非必须，可不必做血清热灭活这一处理。

图1 使用未灭活或灭活血清的细胞生长状况

Q4. 培养哪些细胞需要热灭活血清？

培养胚胎干细胞（ESC）、平滑肌细胞、免疫细胞和昆虫细胞时，建议使用热灭活血清。

Q5. 血清如何热灭活？

有研究表明，热灭活时若水浴温度过高或加热时间过长，都会降低血清的性能，从而影响细胞生长（如下图2和3所示）。因此建议将血清加热至56 °C，持续30分钟进行热灭活。

图2 使用不同温度热灭活血清对细胞生长的影响

图3 使用不同时间热灭活血清对细胞生长的影响

注意：灭活时，若使用水浴槽，请保持水面与血清液面等高。灭活后，建议使用冷水浴降温。

Q6. 什么是γ-辐照血清？

γ-辐照是将血清暴露于25-35 kGy剂量的钴-60源，使病毒和支原体等其他微生物菌体失活。γ-辐照不会降低血清的理化特性或细胞培养性能。

Q7. FBS的颜色与之前的批次不一样。这会影响血清性能吗？

血清中含有微量的血红蛋白，血清的颜色取决于血红蛋白浓度，颜色的深浅和血清的性能无关。