细胞分选试剂盒的核心目标是从混合细胞群体中高效、特异地分离目标细胞,其主流技术主要基于磁珠分选法(如MACS技术)或荧光激活细胞分选法(FACS)。今天详细介绍一下MACS:
一、MACS核心原理
利用抗体-磁珠复合物特异性结合目标细胞表面标志物,通过磁场吸附实现分离。
二、MACS分选流程
1.标记磁珠:
试剂盒提供预先偶联特异性抗体(如抗CD4、CD19)的磁性微珠。
将磁珠与细胞悬液混合,磁珠通过抗体与目标细胞表面抗原结合。
2.磁场分离:
将混合液置于磁力架(如Miltenyi的MACSiMAG分离器)中,磁场吸附磁珠标记的细胞。
未标记的细胞(非目标细胞)保留在溶液中,通过倾倒或吸弃去除。
3. 收集目标细胞:
移除磁场后,用缓冲液洗脱磁珠标记的细胞,获得高纯度目标群体。
三、MACS分选模式
正选(Positive Selection):直接标记并分离目标细胞(如CD4+ T细胞)。
负选(Negative Selection):标记并去除非目标细胞,剩余未标记的即为目标细胞(如未成熟的造血干细胞)。
四、MACS优势
无需复杂仪器,操作简单快速(约30分钟)。
细胞活性高(>90%),适合后续功能实验(如培养、移植)。
五、应用场景
免疫学研究:分离T细胞、B细胞、NK细胞等亚群。
肿瘤治疗:分选CAR-T细胞或肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)。
干细胞研究:富集造血干细胞或间充质干细胞。
六、注意事项
抗体选择:需验证抗体与目标物种及细胞类型的兼容性。
细胞活性:避免长时间孵育或剧烈离心损伤细胞。
交叉污染:分选前过滤细胞悬液(如40 μm滤网)去除团块。
七、总结
细胞分选试剂盒通过特异性标记与物理分离技术(磁场或荧光信号)的结合,实现了对目标细胞的高效纯化。磁珠法适合快速、低成本的分选需求,而FACS法则在复杂多标志物分选中更具优势,两者共同推动了基础研究与临床应用的进展。
