pvdf膜使用前怎么处理

PVDF膜在使用前以下关键处理步骤，以确保其最佳蛋白结合性能和实验结果的可靠性：

一、剪裁与防护

尺寸匹配：用干净剪刀将PVDF膜剪成略大于凝胶的尺寸（边缘多出1-2mm）。

防污染：全程佩戴无粉手套操作，避免手指直接接触膜表面（油脂或蛋白污染会导致高背景）。

二、甲醇活化（关键步骤）

目的：破除PVDF膜的疏水性，使其变为亲水状态，便于蛋白结合。

操作：

将PVDF膜浸入100%甲醇中，全部浸润（约10-30秒）。

持续浸泡 1-2分钟（时间不足会导致活化不全，过长可能损伤膜结构）。

原理：甲醇溶解PVDF膜表面氟碳链，暴露极性基团，增强亲水性。

三、 转移缓冲液平衡

步骤：

将活化后的PVDF膜从甲醇中取出，立即浸入 转膜缓冲液（如Tris-Glycine含20%甲醇）中。

平衡时间 ≥5分钟，期间轻摇去除残留甲醇。

注意：

若缓冲液不含甲醇（如半干转条件），需改用纯水或对应缓冲液平衡。

平衡不充分会导致转膜时甲醇残留干扰电场稳定性。

四、可选预处理（特殊需求）

SDS预润湿：对高分子量蛋白（＞150kDa），可短暂浸泡含0.1% SDS的转膜缓冲液（增强蛋白转移效率）。

PVDF膜再生：若重复使用旧膜，需先以0.1M NaOH浸泡15分钟，纯水冲洗后再活化。

五、关键注意事项

通过规范处理，PVDF膜可有效结合蛋白质（结合量达150-200μg/cm²），同时降低非特异性吸附，确保Western Blot、蛋白测序等实验的灵敏度和重复性。

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