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022-66387942一、用途
用于将DNA(质粒、siRNA、miRNA等)高效转染至贴壁或悬浮培养的哺乳动物细胞中。
二、操作流程(简化版)
详细版见《polyplus转染试剂jetOPTIMUS®产品说明书》
A. 试剂准备
使用前将jetPRIME® 室温平衡15分钟,轻柔混匀。
用无菌缓冲液(如150mM NaCl)稀释DNA。
B. 混合
按比例混合稀释的DNA与jetPRIME®(例如:1µg DNA : 2µL 试剂)。
涡旋振荡10秒,室温静置10分钟形成转染复合物。
C. 转染
将复合物逐滴加入细胞培养基中,轻柔摇晃培养皿混匀。
37°C孵育4-24小时后更换新鲜培养基(视细胞类型而定)。
三、推荐比例(参考)
细胞类型 | DNA(µg) : jetPRIME®(µL) |
标准贴壁细胞(如HEK293) | 1 : 2 |
难转染细胞 | 1 : 3–4 |
四、注意事项
细胞密度:转染时细胞应达60-80%汇合度。
血清兼容性:可直接加入含血清的培养基中。
保存条件:4°C储存(勿冷冻),避免光照。
安全性:操作时戴手套,在生物安全柜中进行。
五、提高敏感细胞细胞活力的提示
(1)转染后4小时更换培养基。
(2)将DNA量减少到0.5倍,同时保持之前使用的DNA/jetOPTIMUS®比例。
(3)在较早的时间点(例如转染后24小时而不是48小时)分析转染。
(4)在敏感细胞的还原血清培养基中进行转染。
(5)检查靶基因是否影响细胞活力。
(6)确保细胞在转染前已传代两次以上且少于20次。
(7)丢弃过度培养的细胞。
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