外泌体提取试剂盒原理

外泌体提取试剂盒的原理多种多样，但其核心都是基于外泌体的物理特性或生化特性，将其从复杂的生物样品（如细胞上清、血清、血浆）中分离出来。

目前主流的外泌体提取试剂盒主要基于以下几大原理：

外泌体的形成和携带物质

一、外泌体提取试剂盒原理一：超速离心法 (Ultracentrifugation, UC) - “金标准"

虽然传统上不算是“试剂盒"，但它是所有方法的比对基准。现在也有配套的密度梯度试剂。

原理：利用外泌体的大小、密度和沉降系数与样品中其他成分（如蛋白质、细胞碎片、大囊泡）的差异，在超高速离心力（通常≥100,000 × g）下，外泌体会被沉淀到管底。

特点：

优点：被认为是提取外泌体的“黄金标准"；无需特殊化学试剂，可获取较纯净的外泌体。

缺点：设备极其昂贵；流程耗时漫长（数小时至数天）；需要大量起始样本；高速离心力可能损伤外泌体结构，导致聚集。

二、外泌体提取试剂盒原理二：聚合物的沉淀法 (Polymer-based Precipitation)

这是目前zui常用的试剂盒原理。例如 Qiagen exoEasy, System Biosciences (SBI) ExoQuick, 和 Wako 的普通提取试剂。

原理：

向样品中加入亲水性聚合物（如PEG）。

这些聚合物会与溶液中的水分子结合，“劫持"水化层，破坏外泌体的溶解性。

同时，它们能形成一个“网"来捕获外泌体。

在低速离心力下，外泌体-聚合物复合物就会从溶液中共同沉淀下来。

特点：

优点：操作简单快速；无需昂贵设备；起始样本量要求低；回收效率高。

缺点：纯度较低，会共沉淀蛋白质聚合物、脂蛋白等杂质；沉淀可能难以重悬；聚合物可能干扰下游分析。

三、外泌体提取试剂盒原理三：尺寸排阻色谱法 (Size-exclusion Chromatography, SEC)

能获得高纯度、高完整性外泌体的方法。例如 qEV系列/Izon Science 产品。

原理：

样品被加载到一个充满多孔聚合物微球的色谱柱上

不同大小的分子在通过柱子时，路径长短不同。

大分子（如外泌体）无法进入微球的小孔，会沿着微球之间的缝隙快速流动，最先被洗脱出来。

小分子（如蛋白质、小RNA）会进入微球的大量孔隙中，路径更长，较晚被洗脱出来。

通过分步收集，即可获得纯度很高的外泌体组分。

特点：

优点：能获得完整性好、生物活性高的外泌体；纯度远高于沉淀法；避免了聚集效应。

缺点：样本可能被稀释；上样量有限；对于粘性样本（如血浆）易堵塞柱子。

四、外泌体提取试剂盒原理四：免疫亲和捕获法 (Immunoaffinity Capture)

纯度最高、特异性zui强的方法。例如 Wako的 MagCapture™、CD9/CD63/CD81抗体磁珠试剂盒。

原理：

利用外泌体表面特异性标志物（如 CD9, CD63, CD81, EpCAM 等）。

将针对这些标志物的抗体固定在固相支持物上（如磁珠、平板、色谱柱）。

当样品流过时，表面带有相应标志物的外泌体会被抗体特异性捕获，而杂质则被洗去。

通过改变pH值或使用竞争性肽段进行洗脱，即可得到高纯度的特定外泌体亚群。

特点：

优点：纯度ji高；可用于分离特定细胞来源的外泌体亚群。

缺点：成本昂贵；洗脱条件可能较剧烈，损伤外泌体活性；只能捕获表达特定标志物的外泌体，会丢失其他亚群。

五、外泌体提取试剂盒原理五：微流控技术 (Microfluidics)

新兴的前沿技术，主要用于集成化、自动化的快速检测。

原理：在芯片上构建微米级的通道，通过声学、力学或免疫亲和原理，在流体中实时捕获和分离外泌体。

特点：

优点：所需样本量极少；速度快；有望实现高度集成化和自动化。

缺点：技术尚未wanquan成熟和普及；通量较低；设备成本高。

总结与选择指南

如何选择？

追求速度和简便 → 沉淀法试剂盒

追求纯度和生物活性 → 尺寸排阻色谱试剂盒

追求超高纯度或特定亚型 → 免疫亲和捕获试剂盒

有超离设备且不赶时间 → 超速离心法

产品推荐：EZB外泌体提取试剂盒