在单细胞测序、原代细胞培养等高精度实验中,细胞碎片污染是导致数据偏差的核心风险。百奥益康通用细胞碎片去除试剂盒(货号BA3304),通过密度梯度离心-选择性裂解技术,可在20分钟内清除样本中90%以上的细胞碎片与杂质,为下游实验提供高纯度细胞悬液。
一、技术原理:双机制协同净化
1.温和裂解:DRS缓冲液选择性裂解破损细胞,释放的DNA碎片形成网状结构包裹杂质
2.密度分层:通过3000×g梯度离心,形成三层结构:
上层:含细胞碎片与蛋白聚集体
中层:网状DNA-杂质复合物
底层:完整目标细胞
3. 精准去除:移除上中两层,保留底层高活力细胞(活性损失<5%)
二、标准化操作流程(25分钟完成)
1.样本预处理
将细胞悬液经300×g离心5分钟,用3.1 mL含5% FBS的PBS重悬
2.DRS缓冲液处理
加入900 μL DRS缓冲液,轻柔吹打混匀10次,避免涡旋振荡
3.梯度离心分层
沿管壁缓慢加入4 mL PBS覆盖液层,3000×g水平离心20分钟(启用离心机缓升缓降模式)
4.碎片层去除
分层后依次吸取:
➤ 上层4 mL PBS
➤ 中层DRS-碎片复合物
保留底层细胞沉淀
5.细胞回收
用含5% FBS的PBS重悬细胞,经20 μm滤网过滤,即获高纯度悬液
三、性能验证数据
· 碎片清除率:92.3% ± 4.1%(流式细胞术检测)
· 细胞回收率:85%以上(与初始活细胞数正相关)
· 活性保持:处理前后细胞活性差异<3%(台盼蓝检测)
· 兼容性验证:适用于PBMC、肿瘤浸润淋巴细胞、干细胞等多种样本
四、三大应用场景突破
1.单细胞测序前处理:
◎ 碎片残留率<5%,满足10X Genomics Chromium系统建库要求
◎ 有效提mRNA捕获效率(较未处理组提升30%)
2. 原代细胞培养:
◎ 去除凋亡细胞碎片,将原代成纤维细胞增殖速度提升2倍
◎ 降低支原体污染风险(碎片携带微生物减少80%)
3. 流式细胞分选:
◎ 前向散射/侧向散射图背景信号降低至处理前的1/4
◎ 提高罕见细胞亚群检测灵敏度(如循环肿瘤细胞检出限达0.01%)
选择BA3304的四大优势:
✔ 广谱适用:兼容人/小鼠/大鼠等哺乳动物细胞
✔ 极简操作:无需特殊设备,标准离心机即可完成
✔ 成本可控:单次处理成本仅为流式分选的1/10
✔ 灵活拓展:可搭配BA3311红细胞裂解液同步去除非核细胞
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