美天旎 MACS 组织储存溶液使用方法详解：从样本采集到解离的最佳实践

一、 实验前准备

1. 器材准备： 准备无菌的手术刀、手术剪、镊子、50mL 或 15mL 圆锥底离心管、无菌培养皿。

2. 试剂检查： 确认 美天旎 MACS 组织储存溶液 (130-100-008) 包装完好，溶液清澈透明，无浑浊或沉淀。该试剂为即用型，无需稀释或过滤除菌（除非包装已打开）。

3. 环境控制： 所有操作步骤建议在生物安全柜（超净台）内进行，以维持无菌环境。

二、 标准操作流程（SOP）

步骤 1：组织采集与初步清洗

• 操作要点： 轻轻晃动培养皿，洗去组织表面残留的血液、坏死碎片或污染物。这一步对于防止细菌污染和非特异性细胞粘附至关重要。

步骤 2：组织修剪与切块

• 关键参数： 建议将组织切成直径或边长约为 3mm - 6mm 的小块。

• 注意事项：

• 切勿过小： 小于 2mm 的碎块会增加细胞损伤的风险，且边缘细胞容易死亡。

• 切勿过大： 超过 1cm 的大块会导致溶液无法渗透到组织中心，造成核心坏死。

• 去除明显的坏死组织、钙化点及过多的脂肪组织（除非脂肪是研究对象）。

步骤 3：浸泡与储存

• 体积配比： 建议按照 1mL 比例对应 0.5g - 1g 组织的比例添加溶液。

• wan全浸没： 确保所有组织块wan全浸没在液面以下。如有漂浮组织，可轻轻压下或增加溶液量。

步骤 4：温控与运输

• 储存温度： 立即将离心管置于 2-8°C（冰箱冷藏层）环境中。

• 严禁冷冻： 绝对不可将溶液放入 - 20°C 或 - 80°C 冷冻，冷冻会破坏细胞渗透压，导致细胞破裂。

• 运输要求： 若需异地运输，应使用冷藏箱配合冰袋或蓝冰进行冷链运输，确保全程温度维持在 2-8°C。避免组织直接接触冰袋，以防局部冻伤。

步骤 5：后续处理（解离）

• 取出组织： 无菌条件下取出组织块。

• 清洗（可选）： 可用冷 PBS 冲洗一次，以去除残留的储存液。

• 开始解离： 立即使用美天旎 MACS 组织解离试剂盒及相关程序进行机械法和酶法解离。

三、 关键注意事项与技巧

1. 时间窗口管理：虽然 美天旎 MACS 组织储存溶液 (130-100-008) 支持最长 48 小时的保存，但为了获得最佳细胞活力，建议在 24 小时内 完成解离处理。保存时间越长，虽然活细胞比例尚可，但某些敏感的细胞亚群可能会逐渐减少。
2. 避免反复冻融：该试剂通常为 100mL 或 500mL 大包装。建议根据单次使用量进行无菌分装，避免反复开启瓶盖造成污染。分装后的试剂在 2-8°C 密封保存，有效期可达数月（具体请参照瓶标签）。
3. 兼容性说明：该溶液专为保存未处理的新鲜组织设计。切勿将已经制备好的单细胞悬液重悬于该溶液中长期保存，单细胞应使用专用的细胞冻存液或含血清培养基处理。
4. 抗干扰能力：如果组织样本污染严重（如含有大量脓液或坏死组织），建议先进行更ce底的清洗，或考虑在溶液中添加适量的双抗（青霉素 - 链霉素），尽管 MACS 组织储存溶液本身具有一定的抑菌辅助作用（通过低温环境），但并非抗生素溶液。

四、 常见问题解答（FAQ）

• Q: 使用该溶液后，解离出的细胞得率低是什么原因？

• A: 可能是组织切块过大，导致中心细胞缺氧死亡；或者保存时间超过了 48 小时。请检查切割尺寸和保存时长。

• Q: 可以将组织从该溶液中取出后放入 - 80°C 冻存吗？

• A: 可以。该溶液主要用于低温运输和短期暂存。如果您需要长期冻存组织，可以从该溶液中取出组织，吸干液体后放入专用的组织冻存液（如含 10% DMSO 的 FBS）中程序降温冻存。

• Q: 该溶液是否适合所有类型的组织？

• A: 适用于大多数实体组织，如肿瘤、皮肤、肌肉、淋巴结、脾脏、脑组织等。对于全血样本，请使用专门的抗凝剂，而非组织储存溶液。

五、 总结