Takara RR036A 说明书：PrimeScript RT 酶法精准去除 gDNA 的操作指南

在分子生物学研究中，实时荧光定量 PCR (qPCR) 是检测基因表达水平的金标准。然而，RNA 样本中微量的基因组 DNA (gDNA) 污染往往会干扰定量结果，导致假阳性。Takara 推出的 Takara RR036A (PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser) 正是为解决这一痛点而生。为了确保实验的顺利进行，深入研读 Takara RR036A 说明书，掌握其组分特性与操作细节，是每一位实验人员获得高保真 cDNA 的前提。本文将基于说明书内容，详细解析该试剂盒的核心优势、操作流程及注意事项。

Takara代理——天津益元利康生物科技有限公司

一、 产品概述与核心优势

Takara RR036A 说明书 指出，该试剂盒全称为 PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)。它是一款专门用于两步法 Real Time PCR 的逆转录 (RT) 试剂盒。其最大的亮点在于配备了强效的 gDNA Eraser (基因组 DNA 去除酶)，能够在逆转录反应前高效去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。

1. 高效的 gDNA 去除能力：

   试剂盒中的 gDNA Erase 是一种具有ji高活性的酶混合物，能在 37°C 下迅速降解双链 DNA。根据 Takara RR036A 说明书 的验证数据，该处理步骤几乎可以wan全消除 gDNA 对后续 qPCR 的干扰，特别适用于无内含子基因的检测。

2. 优异的逆转录性能：

   采用 Takara du有的 PrimeScript Reverse Transcriptase，这是一种具有强链置换活性的 RNA 依赖性 DNA 聚合酶。它不仅对 RNA 二级结构具有ji强的耐受性，还能在高温下进行反应，有效降低了 RNA 二级结构对逆转录的阻碍。

3. 广泛的模板适用性：

   无论是 Total RNA 还是 mRNA，无论是高丰度还是低丰度基因，该试剂盒均能实现高灵敏度、高重复性的 cDNA 合成。

二、 试剂盒组分解析

• 5x PrimeScript Buffer 2 (Real Time)：含有 dNTP Mixture 和 Mg2+ 的优化缓冲液，为逆转录酶提供最佳反应环境。

• PrimeScript RT Enzyme Mix I：含有 PrimeScript Reverse Transcriptase 和 RNase Inhibitor。RNase Inhibitor 的加入有效防止了反应体系内 RNase 对 RNA 模板的降解。

• gDNA Eraser Buffer：专为 gDNA Erase 设计的反应缓冲液。

• gDNA Eraser：用于去除基因组 DNA 的酶制剂。

• Oligo dT Primer 和 Random 6 mers：提供两种引物策略。Oligo dT Primer 适用于具有 Poly (A) 尾巴的 mRNA；Random 6 mers 则适用于 rRNA、不具 Poly (A) 尾的 RNA 或长片段 RNA 的逆转录。Takara RR036A 说明书 建议根据实验需求选择或混合使用。

三、 标准操作流程详解

1. 第一步：基因组 DNA 去除反应

• 体系配制：在冰上配制反应液，包含 5x gDNA Eraser Buffer、gDNA Eraser、Total RNA 和 RNase Free dH2O。

• 反应条件：42°C 孵育 2 分钟（或根据说明书建议时间），随后 4°C 保存。此步骤极为关键，务必严格控制时间，避免过度处理。

• 终止：该步骤完成后，体系直接用于下一步，无需纯化。

2. 第二步：逆转录反应

• 体系配制：向第一步的反应液中直接加入 5x PrimeScript Buffer 2、PrimeScript RT Enzyme Mix I、Oligo dT Primer/Random 6 mers 和 RNase Free dH2O。

• 反应条件：通常程序为 37°C 逆转录 15 分钟，随后 85°C 加热 5 秒钟使酶失活，最后 4°C 保存。

• 结果：反应结束后，体系中的 cDNA 即可作为 qPCR 的模板进行扩增。

四、 常见问题与注意事项 (FAQ)

• gDNA 去除不ce底：

  如果在无逆转录酶的对照（No-RT Control）中检测到扩增信号，说明 gDNA 残留。Takara RR036A 说明书 建议，可能是 gDNA Erase 保存不当失活，或者 RNA 样本中 DNA 污染过于严重。此时建议增加 gDNA Erase 的用量或延长处理时间。

• 逆转录效率低：

  可能是 RNA 模板存在严重的二级结构或含有抑制剂。尝试提高逆转录温度（如使用 42°C-50°C）或稀释 RNA 模板可能有所帮助。

• 引物选择策略：

  对于长片段 RNA（>5kb）或结构复杂的 RNA，Takara RR036A 说明书 推荐使用 Random 6 mers 或 Oligo dT Primer 与 Random 6 mers 的混合物，以获得全长度的 cDNA。

• 试剂冻融：

  说明书建议将酶类分装后避光保存于 -20°C，避免反复冻融导致活性下降。

五、 总结

天津益元利康生物科技有限公司 专注于为国内生命科学研究提供高品质的分子生物学试剂。作为专业的供应商，天津益元利康深知优质试剂对实验成功的重要性。我们原厂正品供应 Takara Takara RR036A (PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser)，确保产品在效期内并通过专业的冷链物流送达您的实验室。如果您在查阅 Takara RR036A 说明书 或操作过程中遇到任何疑问，我们的技术支持团队随时准备为您提供专业的解答与帮助。选择 天津益元利康，让您的分子生物学实验更加精准、高效。