基因组DNA提取常见问题

　　基因组DNA提取常见问题
 

　　你知道基因组DNA提取的常见问题有哪些吗？让我们一起来看看吧！
 

　　一、DNA提取产量低？
 

　　(1)实验材料量太少。适当增加材料用量。
 

　　(2)样本裂解不充分。适当减少样品量，用液氮或匀浆器对样品进行研磨和匀浆，加入裂解液后使其和样品充分混匀，适当延长裂解时间。
 

　　(3)提取材料质量不好。保证样品本身DNA含量，尽量选用富含核酸的组织或新鲜组织提取基因组DNA，样品采集后应尽快保存在-80℃或液氮中，避免样品反复冻融或保存时间过久。若样品DNA含量较少，即使电泳检测不到明显的DNA条带，仍可尝试进行PCR检测，建议使用灵敏度高的酶进行扩增。
 

　　(4)DNA断裂或降解。避免因移液枪反复吹吸或反复冻融样品造成的DNA损伤，及避免在操作过程中带入外源DNase污染。
 

　　(5)若采用试剂盒法(吸附柱法)提取基因组DNA，还有可能因为部分试剂未添加无水乙醇。使用前必须按规定量添加无水乙醇，溶液使用完后立即盖紧盖子。
 

　　二、提取的基因组DNA纯度低，影响下游酶切、PCR等实验？
 

　　(1)DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质。重新纯化DNA，去除残留蛋白和糖酚。
 

　　(2)DNA在溶解前，有乙醇残留抑制后续酶反应。重新沉淀DNA，充分挥发乙醇。
 

　　(3)DNA中有金属离子残留。增加70%乙醇洗涤次数。
 

　　三、试剂盒法(吸附柱法)提取基因组DNA
 

　　(1)DNA盐浓度过高：在使用漂洗液进行清洗时，可沿吸附柱的管壁四周加入，且加入漂洗液后室温静置5min，有助于清洗掉吸附柱膜上残留的盐离子。
 

　　(2)洗脱的DNA中残留乙醇：向吸附柱中加入洗脱液前，需室温静置2min，让残留的乙醇挥发后进行洗脱。
 

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