WB实验基本原理

　　WB 是进行蛋白质分析流行和成熟的技术之一，全称为蛋白质免疫印迹，那么你知道WB实验的基本原理是什么吗？让我们一起来看看吧！
 

　　WB的由来
 

　　1975年，英国人Edwin Mellor Southern发明了基因组DNA特定序列定位的方法：
 

　　将待测定DNA分子从琼脂糖凝胶中转移到一定的固相支持物硝酸纤维素膜(NC膜)上，即印迹(blotting)，然后膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下杂交，检测特定DNA片段，并将这种方法命名为Southern印迹法；后来Alwine又用类似方法检测RNA，正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交；1981年Burette成功将对单向电泳分离后的蛋白质分子转印到膜上并进行免疫学分析(如抗体抗原特异性结合)，这种印迹分析称为Western印迹法；而Eastern blotting是Western blotting的变形，只是检测对象变成了双向电泳后的蛋白质分子(所谓的双向电泳是等电聚焦-聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF-PAGE)分离蛋白质)。
 

　　WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。Western Blotting先使用PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)电泳分离出待检测的蛋白质，再用电场装置印迹至固相介质(如PVDF膜)上，固相介质以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及生物学活性不变。再以膜上的蛋白质片段作为抗原，与一抗(“探针”)特异性结合起免疫反应，再与酶或同位素标记标记的二抗结合，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
 

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