抗体使用避坑指南

　　抗体是生命科学实验的“基石”，但也是最容易出问题的环节之一。踩中一个“雷区”，就可能导致几个月的心血白费。以下为您梳理了抗体使用过程中最常见的“雷区”及避坑指南，涵盖了从存储到验证的全流程。
 

　　一、抗体使用雷区一：存储不当——“生死攸关的第一步”
 

　　错误做法：
 

　　将浓缩抗体长期存放在4°C(非“即用型”抗体)。
 

　　反复冻融抗体。
 

　　将分装抗体存放在冰箱门架上，温度波动剧烈。
 

　　避坑指南：
 

　　遵循说明书！绝大多数浓缩抗体必须-20°C长期保存。

 

　　坚决分装！根据使用频率，将抗体无菌分装成小份(如5-10μL/管)，避免反复冻融。
 

　　使用抗体存储盒：将分装管放入装有异丙醇的-20°C专用抗体存储盒中，确保温度稳定，避免冰晶形成。
 

　　工作液的保存：稀释后的抗体工作液通常不稳定，应现用现配，或在4°C短期保存(1-2周)，并加入防腐剂(如0.02%叠氮化钠，注意：有毒且会抑制某些酶活性)。
 

　　二、抗体使用雷区二：实验设计与优化不足——“盲目上阵，必败无疑”
 

　　错误做法：
 

　　直接使用说明书推荐的稀释度，不进行梯度预实验。
 

　　不设置或设置错误的阳性/阴性对照。
 

　　不同实验类型(WB/IHC/IF/FC)使用相同的稀释度。
 

　　避坑指南：
 

　　必须进行抗体滴定！这是最重要的优化步骤。在您的实验系统下，做一个梯度稀释(如1:100,1:500,1:1000,1:2000)，找到信噪比最高的最佳稀释度。
 

　　设立严谨的对照：
 

　　阳性对照：已知表达目标蛋白的细胞系或组织。验证实验体系有效。
 

　　阴性对照：
 

　　实验阴性对照(至关重要！)：使用同型IgG或不含一抗的缓冲液。这是判断信号特异性的金标准。
 

　　生物学阴性对照：已知不表达目标蛋白的细胞系或组织(如基因敲除细胞)。
 

　　明确应用类型：务必确认抗体适用于您要做的实验(WB,IHC,IF,FC等)。用于WB的抗体可能不适用于IHC，反之亦然。
 

　　三、抗体使用雷区三：操作与流程不规范——“细节决定成败”
 

　　错误做法：
 

　　WB转膜不彻底或过转。
 

　　IHC/IF中抗原修复方法或条件错误。
 

　　封闭不充分或封闭过度。
 

　　洗脱不充分或过于剧烈。
 

　　避坑指南：
 

　　WB：
 

　　验证转膜效率：使用可逆的染液(如丽春红S)或考马斯亮蓝染凝胶，确认蛋白已转至膜上。
 

　　优化封闭：常用5%BSA或脱脂牛奶，注意磷酸化蛋白检测需用BSA，因为牛奶中含有酪蛋白磷酸化。
 

　　IHC/IF：
 

　　优化抗原修复：根据目标抗原选择柠檬酸盐(pH6.0)或EDTA(pH8.0-9.0)缓冲液，并优化加热时间/压力。
 

　　防止切片干燥：任何时候都不要让组织切片干燥，否则会导致非特异性背景极高。
 

　　充分洗涤：使用足够的PBST或TBST，每次洗涤5分钟，洗3次，彻底去除未结合的抗体。
 

　　四、抗体使用雷区四：抗体本身的质量与选择--“选择大于努力”
 

　　选择可靠品牌： 优先选择CST, Abcam, Thermo Fisher等口碑好的品牌。
 

　　查阅数据： 购买前，务必在上查看该抗体的应用数据(WB、IHC等图片)和参考文献。
 

　　利用引用文献： 在PubMed上搜索该抗体的货号，查看其他同行在高质量期刊中是如何使用和验证该抗体的。

 

　　遵循以上指南，您可以极大地避免踩雷，确保实验结果的可靠性、可重复性和科学性。祝您实验顺利！
 

　　CST, Abcam, Thermo Fisher、Origene、伊莱瑞特代理--天津益元利康有限公司，提供各种抗体、试剂盒、细胞、蛋白、耗材等。该公司是一家专注于生命科学实验室快速消耗品为主营方向的生命科技企业，提供完整的产品和服务体系，为广大的科研用户提供实验室一站式服务。益元利康已成为多家生物品牌的代理商，如ALZET、MedKoo、EZB、WaKo、Zymoresearch、Qiagen等，为用户提供完善的产品、专业的咨询，助力推动中国生命科学研究快速发展。