流式细胞仪怎么分选T细胞?

2024-11-18 上文介绍了流式细胞术的原理及应用，今天让我们学习一下怎么用流式细胞仪分选T细胞吧~一、样本制备1.取样:取100μL抗凝血。2.标记：根据抗体说明书标记实验管。混匀后，室温避光孵育15分钟。3.溶血：将10×裂红液用水稀释10倍，每管加入1mL，振荡器混匀后室温避光静置10分钟，300g，4°C离心5分钟。4.洗涤：弃去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g离心洗涤5分钟，洗2-3次。5.上机检测：弃去上清后加入500μL1×PBS，混匀悬浮后过滤，避光等待上机检测。二、仪...

流式细胞术原理及应用

2024-11-15 流式细胞仪在手，却不知道原理？快来看看这篇文章吧！一、流式细胞术实验原理流式细胞术（FlowCytometry,FCM）是一种单细胞定量分析技术，该技术通过测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收等参数，可以定量分析细胞的结构特征（如DNA含量、蛋白、细胞膜、胞浆或胞核抗原表达量）和功能特征（如细胞内酶活性、钙流变化等）等多种重要参数，进行细胞特征分析与分选。它的核心功能是将混合物中的不同细胞分离并计数，将感兴趣的细胞分选出来，提供分类比例并进行进一步分析。二、流式细胞技术应用1...

引物探针的使用方法有哪些？

2024-11-14 一、引物探针的使用步骤‌引物探针使用步骤一：‌设计引物和探针‌：首先需要根据目标DNA序列设计特异性引物和探针。引物的长度一般为20-25个核苷酸，探针的长度一般为15-25个核苷酸。设计时要注意避免非特异性扩增，确保引物的特异性和探针的Tm值比引物Tm值高8-10°C‌。引物探针使用步骤二：‌提取模板DNA‌：从待测样本中提取DNA，作为PCR反应的模板。确保模板DNA的质量和浓度，以获得可靠的实验结果‌。引物探针使用步骤三：‌配制PCR反应体系‌：根据实验需求，配制含有引...

IHC出现假阳性、假阴性等问题该怎么办?

2024-11-13 ‌免疫组化（IHC）实验中出现假阳性和假阴性了怎么办呢？一、假阳性的处理1.‌降低一抗浓度‌：通过降低一抗的浓度，可以减少非特异性结合，从而降低假阳性。通常，降低浓度至能看到阳性表达且能明显区分阳性区域与周围间质即可‌。2.‌调整封闭条件‌：逐步提高封闭条件，从山羊血清到5%BSA+山羊血清，最终至5%脱脂奶。通常调整至5%BSA+山羊血清即可，不建议轻易使用5%脱脂奶‌。3.‌选择合适的二抗‌：对于动物标本，选择抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免种属间抗原抗体反应引...

离心柱法提取DNA步骤

2024-11-13 常见核酸提取纯化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分离技术、离心柱纯化法等，今天我们来看下离心柱法的实验步骤和优缺点吧~一、离心柱法提取DNA步骤离心柱法提取DNA步骤一将组织或细胞悬液加入裂解缓冲液，涡旋混匀。裂解缓冲液中含有变性剂（如胍异硫氰酸盐），可以有效地裂解细胞和组织，破坏细胞膜和细胞核膜，同时使核酸与蛋白质分离。离心柱法提取DNA步骤二将裂解液转移到DNASpinColumn中，离心收集流穿液。这个步骤涉及到将裂解液通过一个特殊的膜过滤，该膜具有特定的孔径，允许小分子...

Alzet渗透泵浓度你会计算吗？

2024-11-12 药物浓度的调配需根据每日用药量和缓释泵的输送速率两项参数来计算，每日用药量可通过查阅专业文献获取。此外，每支缓释泵的输送速率信息会附在包装盒上，应根据包装上的速率进行配药。浓度计算举例：2001渗透泵，给药：抗利尿激素(ADH)，1.查阅文献发现，大鼠正常的ADH分泌量为30ng/天/只，或1.25ng/小时/只。然后，计算出完成1.25ng/小时所需输注量所需的ADH浓度：ko=Q•Cd其中ko(µg/hr)是质量输送速率，Cd(µg/µ...

如何对pcr结果进行分析?

2024-11-12 一、PCR结果分析的基本步骤：‌1.基线设置‌：实时PCR反应的基线是指在PCR的初始循环期间的信号水平，通常是3至15个循环之间，此时荧光信号几乎没有变化，可以认为是背景或反应的噪音。2.‌阈值设定‌：‌qPCR的阈值代表的是明显超出基线的扩增信号水平，用以区分明确的扩增信号和背景。通常qPCR仪器自带软件会自动将阈值设置为基线荧光值标准偏差的10倍。3.‌CT值计算‌：Ct是指荧光信号超过阈值时对应的循环数，Ct值与目的基因的起始量成反比，可用于计算DNA初始拷贝数。4....

DMEM培养基变色原因

2024-11-12 DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)培养基广泛应用于细胞培养。一般情况下DMEM培养基呈鲜红色，当细胞状态、培养条件以及培养基成分发生变化，培养基的颜色也会发生变化。以下是DMEM培养基变色的常见原因：1.pH值变化DMEM培养基中含有酚红，它是一种pH指示剂，能够根据培养基的pH值变化而改变颜色。在pH值低于6.8时培养基呈黄色，pH在7.4时为红色，pH高于8.2时则呈紫色。2.细胞代谢活动细胞在代谢过程中，会消耗培养基中的糖分并产生乳酸...