如何降低非特异性扩增？

2024-11-25 一、扩增方式扩增方式一般有两种，对称扩增和不对称扩增。1、对称扩增使用等量的引物进行PCR扩增，扩增产物量随着PCR循环呈指数增长，一般的PCR，使用的都是这种方式。由于TaqDNA聚合酶具有5’-3’外切酶活性，在PCR扩增的过程中会水解探针，导致探针被耗尽，无法用于熔曲分析；若使用抗酶切修饰的探针，可一定程度降低水解，但由于探针阻碍了聚合酶通过，扩增效率会大幅下降。对称扩增产生的互补双链，会与探针竞争结合靶序列，不利于探针结合到靶序列上，熔曲分析可能会出现异常。优点：灵敏...

病毒滴度的单位有哪些？

2024-11-22 一、病毒滴度病毒的滴度：单位体积(通常为mL)液体中具有生物活性的病毒颗粒数。滴度是一个病毒自身复制的数量概念，可分为物理滴度和感染滴度。物理滴度是指包含病毒基因组的病毒颗粒的浓度，可以通过通过定量PCR对病毒颗粒的基因组拷贝数进行检测，也可以通过测定病毒颗粒中的特定蛋白进行定量，但物理滴度未考虑到病毒活性和感染效率，因此是不准确的。感染滴度是指成功转导细胞的病毒颗粒的浓度，须通过细胞感染实验来测定，如利用定量PCR对细胞中的病毒基因拷贝数进行检测，或通过携带荧光的病毒感染细...

IHC染色不均匀分析

2024-11-22 上次我们分享了IHC未染色或无信号的原因分析，这次让我们来看看IHC染色不均匀是为什么吧。一、组织切片制备解释：组织切片薄厚不均匀→建议：更换刀片二、组织固定1.解释：酒精固定不足会产生伪影；→建议：延长固定时间；尝试不同的固定液2.解释：固定延迟导致抗原扩散；建议：立即固定组织；可以考虑使用交联固定剂三、脱蜡解释：脱蜡不wan全→建议：使用新鲜的二甲苯四、抗体兼容性解释：一抗可能结合其他抗原上的表位→建议：从多抗切换至单抗；尝试不同的单抗五、透化解释：细胞膜被破坏，膜蛋白丢...

IHC未染色或无信号原因分析

2024-11-21 IHC未染色或无信号的原因：一、‌抗体问题‌：抗体与一抗或二抗不兼容、抗体浓度不合适、抗体失效或储存不当等都会导致无染色。例如，使用抗一抗种属来源的二抗，确认二抗是否识别一抗的亚型；使用更高浓度的抗体或延长孵育时间；设置阳性对照，确保抗体仍然有效‌。二、‌抗原修复不足‌：固定步骤可能会改变抗体识别的抗原表位，导致抗原修复不足。使用微波或压力锅进行抗原修复，确保使用新鲜配置的修复液‌。三、‌样本处理不当‌：样本存放时间过长、切片制备不当（如脱蜡不ce底）、组织切片干片等都会影响...

蛋白芯片是什么？

2024-11-21 一、蛋白芯片简介‌蛋白芯片‌是一种高通量的蛋白质功能分析检测技术，主要用于监测蛋白质之间的相互作用。其基本原理是将各种蛋白质有序地固定于载体上，然后利用标记了特定荧光物质的抗体与芯片上的蛋白质结合，通过荧光强度分析蛋白质的表达数量和相互作用关系‌。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通过将已知的蛋白质分子固定在固相载体上，然后捕获与之特异性结合的待测蛋白质。这些待测蛋白质可能存在于血清、血浆、尿液等生物样本中。通过洗涤和纯化步骤后，利用荧光扫描仪或激光共聚扫描技术测定各点的荧光强度...

如何提取细胞核蛋白？

2024-11-20 本文介绍一下用匀浆器研磨法提取贴壁细胞核蛋白的具体操作。一、前期准备1、台盼蓝染液：取台盼蓝粉剂，将其溶解在10mL的双蒸水当中配制成质量体积比为4%（4%w/v）的台盼蓝母液。在使用时，利用PBS缓冲液将母液稀释10倍，使其浓度达到0.4%，之后再与细胞悬液混合均匀。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值为7.9）、1.5mmol/L的氯化镁、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫苏糖醇（DTT）。若担心浆蛋白降解会对核蛋白产生影响...

细胞凋亡的检测

2024-11-19 一、光学显微镜观察凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。检测方法：细胞涂片或组织石蜡切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物镜下观察凋亡细胞的形态改变，结合显微测量工具可作凋亡细胞计数。二、视频时差显微技术细胞培养中常用，通过相差显微镜可动态观察细胞凋亡的变化过程，尤其是观察细胞表和外形的变化。检测方法：收集2×10^5细胞/ml培养的细胞，置于多孔培养板，加入凋亡诱导剂，在带有自动摄像装置的相差显微镜下观察凋亡细胞的动态改变，每隔1分钟作序列摄影...

PCR扩增反应中的嵌合体是什么？

2024-11-18 PCR实验中产生的嵌合体你知道是什么呢？它怎么产生的呢？那又如何预防和处理呢？这篇文章让我们一起了解一下吧！一、PCR嵌合体是什么PCR嵌合体(ChimericProducts)：PCR扩增反应中的嵌合体是指一个PCR产物来自两个或多个模板分子，通常是由于延伸未完quan导致的‌。这种现象通常发生在PCR反应中，特别是当使用多重PCR或复杂模板时。嵌合体会导致扩增产物中含有非预期的片段，有可能会影响实验结果的准确性，甚至导致错误的解释。二、形成原理在PCR反应中，DNA模板在...