WB实验之内参蛋白的选择

2024-09-29 在进行WB（WesternBlot）实验时，选择合适的内参确实至关重要。内参的主要作用是像一把“尺子”，用来衡量和校正每个样本的上样量，以及在上样过程中可能产生的实验误差。这样，我们就可以更加确信实验结果的准确性，因为它们已经经过了内参的校正。一、选择内参需要遵循的原则？1.样本种属来源匹配性原则：内参蛋白的选择应基于实验样本的物种来源。对于哺乳动物细胞和组织样本，常用的内参包括β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB等。这些蛋白在哺乳动物细胞中表达稳定，...

为了获得完整的全血RNA，血液采集和抽提有什么建议吗？

2024-09-29 首先血液通常在临床地点采集，但在其他地方进行RNA分离处理。这导致在运输和RNA纯化之前需要RNA稳定。血液含有复杂的细胞成分，含RNA的目标细胞白细胞，占细胞质量的1%以下。血液中含有的生化物质会影响下游的应用。如RNA酶、抗凝血剂和血红素等，需要有专业的产品进行纯化。凯杰提出了解决方案：一、EDTA抗凝管采集的新鲜人全血，可搭配QIAampRNABloodMiniKit（货号：52304）来提取高质量的总RNA（＞200nt）；二、采用PAXgenBloodRNATube...

FUJIFILM Wako——CLEM用荧光蛋白表达载体

2024-09-29 FUJIFILMWako推出了适用于光电关联显微技术（CLEM）的荧光蛋白表达载体。载体表达的荧光蛋白（CLEM-Red,CLEM-Green）可通过CLEM用荧光恢复试剂（TUKSolution,TUKSolutionformulticolor）恢复被氧化锇淬灭的电子显微镜样品中的荧光，从而实现使用光学显微镜和电子显微镜观察同一切片。◆载体概要◆产品一览购前须知：本系列载体仅供科研使用。如有需要，请联系FUJIFILMWako代理——天津益元利康生物科技有限公司！FUJIF...

为什么CCK8镜下趋势是对的，测出来的OD值却不对？？

2024-09-27 CCK-8实验中，镜下趋势正确但测出的OD值不准确的问题可能由多种原因导致。那么影响CCK8结果的因素到底有哪些？一、细胞接种数量过多首先，细胞接种数量过多可能导致OD值过高。当细胞数量过多时，它们可能会重叠生长，导致测得的OD值偏高。此外，如果细胞密度过高，可能会影响药物的均匀分布，从而影响实验结果‌。二、药物作用时间不足或铺板细胞密度太大其次，药物作用时间不足或铺板细胞密度太大也可能导致测量不准确，都可能影响到细胞的生长状态和最终测得的OD值‌。三、误差操作过程中的误差也...

Wnt信号通路

2024-09-27 一、Wnt信号通路简介Wnt在1982年shou次在小鼠胰腺癌中发现，由于此基因激活依赖小鼠乳腺癌相关病毒基因的插入，因此，当被命名为Int-1。之后的研究表明，Int1基因在小鼠正常胚胎发育中发挥重要作用，与果蝇的无翅（Wingless）基因功能相似，均可控制胚胎的轴向发育。此后大量研究提示Int1基因在神经系统胚胎发育中的重要性。因两者基因与蛋白功能的相似性，研究者将Wingless与Int1合并，赋名为Wnt基因。人Wnt基因定位于12q13。在胚胎发育中，Wnt基因调...

ROS的检测方法

2024-09-27 ROS在细胞生命，应激和死亡中具介导作用，今天让我们来聊下ROS吧~一、ROS简介活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）广泛指代氧来源的自由基和非自由基，包含了超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（OH-）、臭氧（O3）和单线态氧（1O2），由于它们含有不成对的电子，因而具有很高的化学反应活性。在机体内，ROS的主要来源之一是线粒体内膜的呼吸链底物端，在线粒体中的电子传递链复合物将电子传递给O2的过程中，有一部分O2被还原，形成O2-或H...

无血清培养基配方、使用方法

2024-09-26 一、前言细胞培养技术在生命科学研究领域是must的。在科研上，细胞培养基（medium）一般都会加入血清（Serum）来补充蛋白质（protein）、生长因子（growthfactor）或其他营养物质（nutrients）等，大部分细胞培养会选择使用胎牛血清（fetalbovineserum,FBS）。近年来也陆续有多样的血清种类，例如：人类血小板生长因子（platelet-richplasma,PRP）、小牛血清（bovinegrowthserum,BGS）等，中科百抗自研...

细胞培养的一般过程

2024-09-26 一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的shou次培养称为原代...