RNA酶保护试验方法优缺点

2024-09-26 一、工作原理RNA酶保护法（RNaseProtectionAssay，RPA，以下简称RPA），是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。基本原理：将标记的特异RNA探针（32P或生物素）与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA酶的消化，故该方法命名为RNA酶保护实验。二、RPA法优...

选择来源安全、可追溯的新生牛血清至关重要

2024-09-26 新生牛血清是从出生0天至1周内或0至30天的新小牛中采集的血液制品，主要用于细胞培养和疫苗生产等生物制药领域。在选购时应该关注血源的可追溯性、质量认证以及适用性；操作时应注意血清的采集、储存条件和逐步适应训练等。新生牛血清的选购指南：1.血源可追溯性：选择来源安全、可追溯的新生牛血清至关重要。市面上存在较多以假乱真的产品，因此科研工作者需要对血清的真实产地、来源进行充分了解和鉴别。2.质量认证：通过严格的质量控制和多项性能测试。例如，某些特优级胎牛血清会有多达70项质量测试，...

生物制药中残留DNA检测试剂盒推荐

2024-09-25 一、前言生物制药是利用生物技术从组织、细胞等生物体中分离出有效成分后制备出的用于预防、治疗和诊断的制品，如疫苗，重组蛋白药等。目前，已开发出多种生产用的细胞系，如CHO细胞、大肠杆菌、VERO细胞等细胞系。然而这些通过大肠杆菌，CHO细胞等培养生产的生物制剂会含有宿主细胞残留DNA等特定的杂质，残留DNA会引发潜在的安全问题（如潜在致瘤性、传染性，甚至增加免疫源性或导致突变），所以相关的法律法规相继出台，以对生物制品中外源宿主DNA残留量进行严格把控。如WHO和美国FDA现行...

大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备

2024-09-25 一、DH5αDH5α是大肠杆菌(Escherichiacoli)的一种感受态细胞系，通常被用于分子生物学实验中。这些细胞被设计成对外源DNA接受性较高，因此在分子克隆、DNA转化和质粒扩增等实验中被广泛使用。DH5α感受态细胞对于吸收外源DNA特别有效，这使得它们在基因工程和分子生物学研究中成为常见的实验室工具。二、操作步骤1、前夜接种受体菌（DH5a或DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2、取1ml过夜培养物转接于100mlLB培养基中，...

BCA法实验原理、操作步骤

2024-09-25 一、实验原理BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法，测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应，使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。‌二、操作步骤准备标准品和样品‌：将标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白BSA）稀释成一系列已知浓度的溶液，作为标准曲线。同时，将待测样品适当稀释，确保其在标准曲线的线性范围内...

植物组织蛋白质提取方法

2024-09-25 方法一：1.根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2.样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。3.用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4.提取上清夜，样品制备完成。5.蛋白质提取液：300ml1Mtris-HCl（PH8）45ml甘油（Glycerol）75ml聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂...

LNA在基因检测中的应用

2024-09-24 一、LNA的介绍锁核酸（Lockednucleicacid，LNA）是一种经过修饰的RNA，LNA中一部分核糖上的2'与4'碳连结在一起。一般可见于A-DNA或RNA。这类核酸可以增加引物或探针（probe）的融解温度（Tm值），加强这些实验用物质的稳定性，可应用在即时聚合酶连锁反应（real-timePCR）等技术中。近期,锁核酸(lockednucleicacid,LNA)作为一种新颖的核苷酸衍生物在药学研究领域引起了人们的广泛关注,有希望成为分子水平治疗各种疾病的新突破...

‌重组质粒发生逃逸的原因

2024-09-24 ‌重组质粒发生逃逸的原因主要包括细胞分裂时不均匀分配、受体细胞的遗传影响、外源基因过度表达、以及环境因素。‌一、‌重组质粒发生逃逸的原因一‌细胞分裂时不均匀分配‌：在细胞分裂过程中，重组质粒可能不均匀地分配到子代细胞中，导致一些子代细胞不含有重组质粒，从而发生逃逸。这种逃逸与质粒的拷贝数有关，低拷贝数质粒在分裂时更有可能导致子代细胞不含重组质粒‌。二、‌重组质粒发生逃逸的原因二‌受体细胞的遗传影响‌：受体细胞的核酸酶可能将重组质粒视为外来DNA并进行降解，阻碍其独立复制。此外...