Omega PCR产物纯化试剂盒D6492说明书

一、 试剂盒概述与原理

  产品名称： E.Z.N.A.® Cycle-Pure Kit

  货号： D6492

  用途： 用于快速纯化PCR、酶切、标记等反应后的DNA产物，去除引物、引物二聚体、dNTPs、盐离子、酶等杂质。

  原理： 基于 硅胶柱（HiBind® DNA Mini Column） 技术。在高盐条件下，DNA会特异性地吸附到硅胶膜上，而杂质则被洗脱。随后在低盐缓冲液中将纯净的DNA洗脱下来。

  特点：

      快速： 整个过程可在15-20分钟内完成。

      高效： 对100bp至10kb的DNA片段回收率高。

      高纯度： 纯化后的DNA可直接用于测序、克隆、酶切、连接等下游实验。

二、 试剂盒组成（以D6492-01为例，100次预装）

请在使用前核对以下试剂是否齐全且充足：

1.  CP Buffer： 结合缓冲液（含高浓度离液盐）。

2.  DNA Wash Buffer（浓缩液）： 漂洗液，使用前必须按说明书要求加入无水乙醇进行稀释（通常是在整瓶中加入指定体积的无水乙醇）。

3.  Elution Buffer： 洗脱液（10 mM Tris-HCl， pH 8.5）。也可使用无菌去离子水（pH > 7.0）代替，但用Elution Buffer洗脱效率通常更高。

4.  HiBind® DNA Mini Columns： 吸附柱（2 mL）及收集管（2 mL）。

5.  说明书。

三、 标准操作流程

实验前准备：

  将DNA Wash Buffer按说明书要求用无水乙醇稀释。

  将CP Buffer和Elution Buffer置于室温融化。

  准备好无水乙醇。

第一步：平衡结合条件

1.  向您的PCR反应液中加入5倍体积的CP Buffer（例如，50μL PCR产物 + 250μL CP Buffer）。

2.  用移液器充分吹打混匀。

第二步：DNA结合

1.  将混合物全部转移到HiBind® DNA Mini Column中（柱子装在2mL收集管内）。

2.  室温（15-25°C），≥10,000 x g 离心 30-60秒。

3.  弃去收集管中的滤液，将柱子放回同一收集管中。

第三步：漂洗

1.  向柱子中加入 700μL DNA Wash Buffer（已含乙醇！）。

2.  室温，≥10,000 x g 离心 30-60秒。

3.  弃滤液，将柱子放回收集管。

4.  重复步骤1-3一次（即总共用Wash Buffer漂洗两次）。

5.  空离以cedi去除残留乙醇： 将空柱以最大转速（≥13,000 x g）离心 2分钟。这一步至关重要，因为残留的乙醇会严重影响下游酶促反应。

第四步：洗脱DNA

1.  将柱子转移到一个新的、干净的 1.5mL 离心管中。

2.  向柱子硅胶膜的正中央，悬空滴加 15-30μL Elution Buffer（或无菌水）。

3.  室温静置 2-5分钟，使缓冲液充分浸润膜。

4.  室温，≥10,000 x g 离心 1分钟。离心管底部的液体即为您纯化后的DNA。

5.  （可选，用于提高得率） 将离心得到的洗脱液重新加回柱子吸附膜中央，再次离心1分钟。

四、 关键要点与经验总结

1.  比例是关键： “PCR产物：CP Buffer = 1：5" 这个比例必须遵守。这是保证DNA高效结合到柱上的前提。如果产物体积很小，可以先用无菌水补足到一定体积（如50μL）再加CP Buffer。

2.  乙醇是必须的： 使用前务必确认 DNA Wash Buffer 已加入正确量的无水乙醇。未加乙醇的Wash Buffer无法有效去除盐分。

3.  cedi去除乙醇： 最后的 “空离2分钟" 步骤绝对不能省略。残留的乙醇会抑制后续的酶（如连接酶、测序酶等）活性。离心后可以打开柱子盖，在室温下再放置几分钟让残余乙醇wanquan挥发。

4.  提高洗脱效率：

      预热Elution Buffer： 将洗脱液预热至65°C或更高温度，可以显著提高DNA的洗脱效率，从而提高最终得率。

      洗脱体积： 洗脱体积越小，浓度越高，但总得率可能会略有下降。根据下游应用需求平衡。对于测序，通常用15-20μL洗脱；对于需要高浓度DNA的应用，可以尝试用10μL洗脱。

5.  关于DNA片段大小： 该试剂盒适用于100bp - 10kb的片段。对于非常小的片段（如<100bp的引物二聚体），在高盐条件下结合效率较低，因此可以被有效去除。对于非常大的片段（>10kb），结合和洗脱效率会下降，需酌情增加结合和洗脱时间。

五、 下游应用

纯化后的DNA适用于：

  Sanger测序

  限制性内切酶消化

  连接与克隆

  体外转录/翻译

  下一代测序（NGS）文库构建等。

六、常见问题排查

Omega代理——天津益元利康生物科技有限公司

天津益元利康生物科技有限公司是一家专注于生命科学的科技企业，由在国内科研试剂领域有着丰富从业经验的技术团队和管理团队组建而成，专营进口生物试剂，科学仪器，实验消耗品，化工原料及药物中间体等。公司与诸多国外品牌签下代理，RD、Abcam、CST、Genetex、Biolegend、ebioscience、polypure、polyplus、Bethyl、Novus等，能为广大科研用户提供数万种试剂、仪器和实验消耗品。
公司将不断把国际上优质的产品引入国内市场，满足客户的需求，公司也将紧跟生命科学的发展，为广大科研工作者探索生命科学的奥秘奉献绵薄之力！