转染试剂是分子生物学与遗传学领域中的小帮手。在它的帮助下,科研人员可以将外源基因如DNA或RNA导入到细胞中进行转录与表达。然而,为了保证高转染效率并保护细胞不受破环,正确的使用和储存转染试剂是至关重要的。不当的保存可能会导致转染试剂的性能有所下降,从而影响实验的准确性。本文将探讨Polysciences PEI转染试剂的保存条件、如何正确储存该转染试剂以及实验中可能会遇到的问题。
一、 保存条件与正确储存方法
正确的储存是保证PEI转染效率和使用寿命的基石。
1. 储存温度:
未灭菌的粉末或浓缩液: 应长期保存在 -20°C。这是最关键的一点,可以最大限度地保持其活性和稳定性。
已过滤除菌的工作液(如1 mg/mL): 可以在4°C保存,也可以在-20°C保存。
4°C保存: 方便使用,避免了反复冻融。在4℃下可以稳定保存数月甚至更久。
-20°C保存: 对于计划长期储存(超过半年)的工作液,建议分装后存于-20°C,以保持最佳性能。
2. 分装策略:
强烈建议进行分装! 无论是粉末还是配制好的工作液,都应根据您的日常使用量,分装到无菌的小管中。
目的: 避免反复冻融和细菌污染。反复冻融是导致PEI转染效率下降和溶液出现沉淀的主要原因之一。
3. 溶解与配制:
粉末配制:
使用无菌的去离子水(如Milli-Q水)溶解粉末,配制成高浓度储备液(如10 mg/mL)。
溶解时,需要用盐酸(HCl)将pH值小心地调节至2.0左右,并加热(如50-60°C)以帮助其wanquan溶解。
wanquan溶解后,再用NaOH将pH值回调至7.0。
最后,必须使用0.22μm的滤膜进行过滤除菌。
工作液稀释: 将无菌的储备液用无菌水稀释成常用的工作液浓度(如1 mg/mL)。同样需要确保无菌操作。
4. 稳定性:
在正确储存条件下(-20°C, 避免反复冻融),PEI非常稳定,可以保存数年。
二、 实验中可能遇到的问题及解决方案
PEI转染的成功依赖于多个因素的精细平衡。以下是常见问题及其排查方向:
请看《PEI转染实验中可能遇到的问题及解决方案》
总结: Polysciences PEI是一款强大且经济的工具,但其成功应用依赖于正确的储存、精确的比例优化和标准化的操作。如果遇到问题,请从PEI/DNA比例、DNA纯度、细胞状态和复合物形成过程这几个核心环节逐一排查。
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