乳腺癌3D类器官培养基

乳腺癌3D类器官培养基产品说明：乳腺癌类器官培养基（Breast Carcinoma Organoid Medium）是一款促进乳腺癌类器官体外形成和扩增的培养基。该产品为无菌的液体混合系统，含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物和生长因子等。该培养基的*配方可以提供一个合适的细胞所需营养环境，选择性地促进人乳腺癌类器官的体外生长和扩增。

乳腺癌3D类器官培养基产品优势：
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤特征

(4) 药敏结果与临床数据接近

使用说明：
◉  实验前准备
（1）提前将24孔细胞培养板置于37℃的培养箱中预热过夜。
（2）将15mL无菌离心管、1.5mLEP管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
（3）提前30 min从4 ℃冰箱取出乳腺癌类器官培养基平衡至室温。（4）提前从-20℃冰箱取出所需体积的细胞外基质胶冰上融化。（5）配置含1%BSA的DMEM培养基冰上预冷备用。
◉  乳腺癌类器官培养
（1）将取自乳腺癌患者的样本进行分离和消化，消化后的细胞悬液进行计数。
（2）按每孔1~2×10*个细胞密度计算所需细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中，离心，弃上清，将细胞沉淀置于冰上。
（3）按1∶2体积比，将一份体积的含1%BSA的DMEM加入2份体积的的细胞外基质胶（Corning#356231）中，轻轻混匀（全程冰上操作），然后在冰上将配好的基质胶混合液与细胞沉淀充分混匀。
（4）将细胞沉淀与基质胶的混合液按照35μL/孔滴在已提前预热好的24孔板中央，使之形成圆顶状胶滴。缓慢将细胞培养板移至培养箱至少30分钟。
（5）待基质胶*凝固，沿24孔壁缓慢加入1mL/孔预先恢复至室温的本类器官培养基，并将培养板置于37℃，5%CO2条件下静置培养。
（6）镜下观察类器官形成情况，每3~4天更换一次培养基。
◉  乳腺癌类器官收集
（1）弃去培养基，用基质胶解离试剂润洗枪头后，每孔加入1mL该试剂，静置1min。
（2）用基质胶解离试剂润洗枪头后，吸取孔内液体，轻轻吹打圆顶状胶滴表面，将胶滴吹散，并将吹散后的含类器官的混合液收集至15 mL离心管中。
（3）重复一次上述操作，将两次洗脱下来的类器官合并收集于同一15mL离心管中。
（4）37℃，75rpm水平摇床上解离10min（具体解离时间根据实际情况决定，以无明显大块胶状物为准）。
（5）10分钟后在4℃下，300g，离心5min，小心吸弃上清，沉淀待用。
◉  乳腺癌类器官传代
（1）收集好的细胞沉淀（以无肉眼可见基质胶状沉淀为准）加入预冷的含1%BSA的DMEM培养基重悬，在4℃下，300g，离心5min。
（2）小心吸弃上清，沉淀用含1%BSA的DMEM培养基重悬计数。
（3）按照培养步骤操作，以大约1000个类器官/孔密度重新接种类器官，继续扩大培养。
注意事项：
1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
3.本产品中不含血清，含有抗生素，如无特别需要，不用额外添加血清和其他抗生素，可直接使用。
4.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。5.请于保质期内使用本产品，超出保质期后，将无法达到理想的使用效果。
6.乳腺组织样本建议为肿瘤术中样本，且肿瘤细胞比例越高（至少>50%），培养成功率越高，不推荐用于少量样本（如穿刺或循环肿瘤细胞）的培养。
7.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。